Měření kanabinoidů – kapitola 2

Autor: Samantha Miller, prezidentka a hlavní vědecká pracovnice společnosti Pure Analytics Cannabis Laboratory.

S rozvojem výdejen léčebného konopí se vyvinulo několik dalších typů podniků a poskytovatelů služeb, kteří pomáhají podporovat jejich potřeby, včetně laboratoří, které testují produkty pro průmysl léčebného konopí. Před existencí legalizace léčebného konopí bylo testování konopí omezeno na analýzy prováděné v rámci vyšetřování trestných činů nebo v rámci jednoho z několika málo výzkumných programů, jako je například program na univerzitě v Mississippi, na který dohlíží Dr. Mahmoud ElSolhy, nebo v Izraeli program Dr. Raphaela Mechoulama, které provádějí vládou schválený výzkum.

Vývoj a pokroky nezávislých laboratoří pro testování konopí ve státech s legalizací konopí pro léčebné i rekreační účely dnes představují vzrušující pokrok jak ve snaze o získání konopí v lékařské kvalitě, tak v jeho pěstování a zpracování podle stanovených norem. Vzrušující je také založení mocného nástroje pro nezávislé pěstitele konopí, který umožňuje řídit strategické šlechtitelské programy zaměřené na izolaci zájmových vlastností a zvyšování účinnosti prediktivním způsobem s využitím testování ve vegetativním stádiu jako pomoc při výběru rostlin pro šlechtění nebo pěstování. Viz „Testování účinnosti kanabinoidů jako nástroj pro farmáře a šlechtitele“.

Dr. Mechoulam přednáší na Hebrejské univerzitě v Jeruzalémě

Laboratoře specializující se na analytiku konopí provádějí několik typů testů na podporu modelu lékařských výdejen, včetně testování účinnosti kanabinoidů, mikrobiologického screeningu na plísně, houby a bakterie a testování pesticidů, které hledá rezidua škodlivých chemických látek, jež mohly být použity během růstového cyklu. S tím, jak se rozšířily testovací služby a legalizované konopí a trh s produkty se rychle vyvíjel a měnil, měnila se i nabídka konopných laboratoří. Mnoho laboratoří nyní nabízí testování na přítomnost aromatických a vonných látek (tzv. terpenů) obsažených v konopí. Příklon k chemicky extrahovaným koncentrátům známým jako vosk, shatter, dabs a další vedl také k poptávce po specifických službách, jako je testování zbytkových rozpouštědel a testování toxických nečistot obsažených v nekvalitním butanu, propanu a plynu CO2, které se často používají k výrobě vosku. V regionech, kde je regulace v centru pozornosti, najdete také státem stanovené požadavky, jako například v Nevadě, které nařizují testování těžkých kovů a testování zbytkových hnojiv a živin.

Výdejna léčebného konopí Florin Wellness Center (FWC) má na této fotografii, kterou pořídil Paul Clemons, čilý obchodní ruch.

První konopná laboratoř v USA byla otevřena v Coloradu. Mnoho dalších ji rychle následovalo, většina z nich v Kalifornii, kde se na rychle se rozvíjejícím trhu s výdejnami téměř přes noc rozšířily stovky výdejen v rámci jednoho města. Nejběžnějším typem testování prováděným konopnými laboratořemi je testování účinnosti kanabinoidů. Testování účinnosti poskytuje pacientům s léčebným konopím důležité informace o účinných látkách v jejich konopí. To jim může pomoci při výběru vhodného konopí na základě jejich konkrétního onemocnění, neboť jim sdělí, které účinné sloučeniny jsou přítomny a jaké je jejich relativní množství. Mezi běžně testované kanabinoidy patří THC, THCA, CBD, CBDA, CBN, CBC a CBG a díky úsilí chemických výrobních společností, které podporují specifické potřeby konopného průmyslu, budou brzy testovány i THCV a CBDV.

Americké konopné laboratoře jsou omezeny v tom, které kanabinoidy mohou oprávněně zahrnout do svých analýz, a to v závislosti na tom, které kanabinoidy je možné zakoupit jako certifikované referenční standardy od společností vyrábějících chemické standardy v USA. V době vydání této knihy byly v USA k dispozici referenční standardy kanabinoidů, které mohou analytici používat, např: THC, THCA, CBD, CBDA, CBG, CBN, CBDV a CBC. Tyto referenční standardy jsou přečištěné kanabinoidy v roztoku a používají se ke kalibraci zařízení používaných k měření účinnosti. Tyto certifikované referenční roztoky umožňují chemikům identifikovat a kvantifikovat kanabinoidy přítomné v extraktu. Pokud je zařízení správně kalibrováno pomocí certifikovaných referenčních standardů, měly by být dvě různé laboratoře schopny změřit stejný konopný extrakt a poskytnout podobný výsledek. Některé konopné laboratoře se rozhodnou uvádět kanabinoidy na základě teoretických údajů namísto ověření identity a množství na základě použití certifikovaného chemického referenčního standardu. Takový postup může být přijatelný ve výzkumném prostředí, ale není přijatelný v prostředí zaměřeném na pacienty, kde by poskytovatelé služeb měli pracovat podle stejných standardů, „jako by“ byli regulováni federální vládou a jejich analýzy „certifikovány“ Na přeplněném a vysoce konkurenčním trhu poskytovatelů služeb však mnozí „dosáhnou“ na tvrzení, že mohou poskytovat služby nebo analyzovat určité sloučeniny, jako jsou exotické a vzácné kanabinoidy, které ostatní nemohou, ve snaze vytvořit si konkurenční výhodu na trhu testování konopí. Pokud nikdo jiný určitou sloučeninu netestuje, pravděpodobně k tomu existuje důvod a legitimita analýzy může být zpochybněna. To nás vede k tomu, že je důležité vybrat si poskytovatele služeb, který dokáže poskytnout spolehlivé a přesné výsledky.

Různé konopné koncentráty (zleva doprava): vosk, shatter, bubble-hash a lisovaný kief (hašiš).

Výběr konopné laboratoře

Když se dispenzáři, pacienti a pěstitelé rozhodnou vybrat toho správného poskytovatele služeb, může se jim rychle zdát, že se prodírají nepřehlednou litanií názorů, marketingových řečí a možností. Mít po ruce fakta o testovacích procesech a vybavení vzhledem k vlastním potřebám vám může pomoci vybrat toho nejlepšího poskytovatele služeb pro vaše potřeby.

Testování účinnosti konopí bylo v počátcích nezávislého odvětví testování konopí v USA zdaleka nejkontroverznější. Vedlo to k mnoha slepým testům poskytovatelů služeb v daném regionu ze strany různých skupin, které se buď snažily proces testování legitimizovat, nebo spíše odhalit nedostatky v postupech poskytovatelů služeb testování konopí. Jeden takový „kruhový test“, který byl v roce 2011 zveřejněn v časopise O’Shaughnessy’s journal of medical cannabis, provedla kalifornská organizace NORML a zahrnula do něj konopné laboratoře nabízející v té době služby ve státě Kalifornie. Výsledky z 10 laboratoří byly poměrně vypovídající a posílily skutečnost, že je nutné používat certifikované referenční materiály, aby výsledky mezi jednotlivými laboratořemi byly v dobré shodě. Bylo zjištěno, že ty laboratoře, které si „vyrobily vlastní“ chemické referenční standardy namísto nákupu certifikovaných, měly výsledky, které se výrazně lišily od zbytku souboru, zatímco dobrá shoda byla zaznamenána u několika laboratoří. Test odhalil několik základních principů, které mohou sloužit jako vodítko při hodnocení konopné laboratoře.
Pochopení testovacích procesů a vybavení vám může pomoci při výběru poskytovatelů služeb a možností testování, které nejlépe vyhovují vašim potřebám. Různí poskytovatelé služeb se specializují na různé typy vzorků a nabízejí různé analytické možnosti. V neregulovaném prostředí testování konopí v době psaní tohoto článku neexistuje žádný specifikovaný způsob provádění konkrétního typu analýzy. To vede k tomu, že se používá řada různých metod, což je pro pacienta i farmáře matoucí, pokud jde o interpretaci a pochopení způsobu porovnávání výsledků mezi jednotlivými poskytovateli služeb. Znalost několika klíčových věcí vám může pomoci nasměrovat se správným směrem.

U této sklizně pupenů odrůdy „Bubba Kush“ bylo naměřeno 13 až 19 % THC. Vzorky byly odebrány na různých částech rostlin.

POROVNÁNÍ GC A HPLC NEBO UPLC

Proces testování účinnosti

Základní kroky procesu testování účinnosti, které ovlivňují přesnost a preciznost výsledků, jsou následující:

1. odběr vzorků
2. kalibrace zařízení
3. kvalita použitých chemických referenčních standardů
4. zkušenosti a odborné znalosti osoby, která práci provádí

Odběr vzorků lze provádět v několika fázích pohybu konopí od pěstitele k pacientovi. Vzorky mohou být nejprve odebrány na farmě a poskytnuty výdejnímu místu, které následně odebere vzorek k předložení laboratoři, kde konopí nakonec odebere sama laboratoř. Každý krok na této cestě – stejně jako manipulace se vzorkem – může ovlivnit konečné výsledky potence a to, zda jsou přítomny kanabinoidy, jako je CBN (degradační produkt). V každém okamžiku, kdy se se vzorkem konopí manipuluje a kdy se z něj odebírá vzorek, musí být reprezentativní pro celé množství materiálu, z něhož byl vybrán. Pro pěstitele, který má několik kilogramů stejného kmene konopí, znamená odběr reprezentativního vzorku provést výběr různě velkých pupenů z různých rostlin a různých částí rostliny. Doporučená velikost vzorku pro předložení laboratoři je 0,25 až 1 gram (0,008-0,035 oz) na libru materiálu.

V laboratoři by měl být vzorek rozřezán nebo rozemlet, aby se homogenizoval nebo sjednotil. Část tohoto homogenizovaného vzorku se zváží na velmi citlivých vahách a poté se extrahuje rozpouštědly, jako je methanol nebo isopropylalkohol, pro analýzu. Váhy používané k vážení vzorků by měly být pravidelně kalibrovány a o těchto kalibracích by měl být veden protokol s datem. V některých laboratořích se vzorky před vážením pro analýzu vysuší na nulovou vlhkost. V závislosti na tom, kolik vlhkosti bylo v rostlinném materiálu na začátku, to může výrazně ovlivnit výsledky v rozmezí 3 až 10 % hmotnosti. Extrakce vzorku zahrnuje vložení odměřeného množství rozpouštědla do lahvičky s naváženým vzorkem konopí. Různé laboratoře používají k extrakci různá rozpouštědla. Ne každé rozpouštědlo odvádí dobrou práci při úplné extrakci všech kanabinoidů. Methanol, ethanol a isopropanol jsou nejlepšími možnostmi pro úplnou (také známou jako vyčerpávající) extrakci, zatímco aceton a hexan používané některými poskytovateli služeb neextrahují THC a CBD tak úplně. Tato neúplná extrakce by způsobila celkové snížení výsledků účinnosti. Po přidání rozpouštědla se může proces extrakce lišit. Někteří mohou vzorek k extrakci zahřívat, jiní mohou vzorek sonikovat pomocí ultrazvukových vln nebo jej vložit do třepací lázně či na stůl. Použití ultrazvukové vodní lázně je obecně nejlepší metodou pro úplnou extrakci kanabinoidů. (Studii zabývající se touto problematikou extrakce rozpouštědlem najdete na adrese https://www.restek.com/row).

V závislosti na typu analyzovaného vzorku může být jeden způsob analýzy vhodnější než jiný. Většina testů účinnosti a pesticidů u vzorků konopí zahrnuje analýzu vzorku pomocí některé formy chromatografického zařízení. Dva běžné typy jsou plynová chromatografie (GC) a vysoce účinná nebo ultraúčinná kapalinová chromatografie (HPLC nebo UPLC). Tyto přístroje mohou být vybaveny mnoha různými typy detektorů. Někteří poskytovatelé služeb o sobě tvrdí, že jsou lepší na základě zvoleného vybavení. Oba typy přístrojů poskytují přesné a životaschopné výsledky, pokud jsou správně kalibrovány a používány zkušenou obsluhou, která dokáže interpretovat a validovat výstupní data.

Plynová chromatografie (GC)

Plynový chromatograf je typ analytického přístroje, ve kterém nízkotlaký proud stlačeného plynu – často vodíku nebo helia – tlačí vzorek od injektoru k detektoru přístroje přes trubičku s malým otvorem, známou jako kolona. Kolona v plynovém chromatografu je 15 až 30 metrů dlouhá trubice z taveného oxidu křemičitého, která je uvnitř potažena různými látkami. Tyto povlaky a délka trubice způsobují, že se sloučeniny při průchodu kolonou od sebe prostorově a časově oddělují. Tímto způsobem se vzorky dostávají do detektoru odděleně a mohou být měřeny jednotlivě. Pokud není analýza provedena správně nebo je provedena příliš rychle, mohou dvě sloučeniny dosáhnout detektoru ve stejnou dobu a být měřeny jako jedna sloučenina, což vede k chybnému výsledku.

Plynové chromatografy mohou být vybaveny několika typy detektorů. Mezi nejběžnější typy detektorů pro testování účinnosti konopí patří FID (plamenový ionizační detektor), MS (hmotnostní spektrometr) a TCD (tepelně vodivostní detektor). Detektory FID a MS jsou nejlepší volbou pro spolehlivou analýzu kanabinoidů pomocí GC. Analýza pesticidů může zahrnovat detektory, jako je ECD (detektor elektronového záchytu), NPD (detektor dusíku a fosforu) nebo PFPD (pulzní plamenový fotometrický detektor).

V případě všech typů detektorů GC se extrakt vzorku, který se vstřikuje do přístroje, často zahřívá na teplotu mezi 150 °C a 200 °C (302 °C až 392 °C). Aby se vzorek odpařil a mohl být proudem plynu přesunut z injektoru na kolonu, je vzorek při vstupu do FID detektoru rovněž spalován. Toto odpařování vzorku dekarboxylovalo nebo aktivovalo všechny kyselé kanabinoidy, jako by byly spáleny nebo odpařeny. V detektoru hmotnostního spektrometru je vzorek ionizován a fragmentován za účelem identifikace přítomných sloučenin. Díky odpařování vzorku je plynová chromatografie nejlepší volbou pro analýzu vzorků konopí určených k inhalaci spalováním nebo odpařováním. Z analytického hlediska toto přímé měření kanabinoidů v jejich dekarboxylovaném stavu nejlépe napodobuje zkušenosti pacienta při inhalaci.

Průběh vzorku v plynovém chromatografu

Automatický vzorkovač plynového chromatografu

Vysokoúčinný kapalinový chromatograf. (Stejný vzhled mají i ultraúčinné kapalinové chromato¬grafy)

Vysoce výkonná a ultra-vysoce výkonná kapalinová chromatografie (HPLC a UPLC)

Vysoce výkonná a ultra-vysoce výkonná kapalinová chromatografie se běžně označují jako HPLC a UPLC. Rozdíl mezi HPLC a UPLC spočívá v maximálním tlaku, který přístrojové vybavení vydrží. Přístroje UPLC mohou ve většině případů analyzovat rychleji a přitom zachovat přesnost ve srovnání s HPLC. U HPLC a UPLC pomáhá vysokotlaký proud rozpouštědla přesouvat sloučeniny od injektoru k detektoru. Stejně jako u GC existuje několik typů detektorů, které se běžně používají pro analýzu kanabinoidů. UV-Vis (ultrafialová viditelná spektroskopie) detektory využívají vlnových délek světla procházejícího vzorkem k měření toho, co se v něm nachází. Detektory s fotodiodovým polem (PDA) a fluorescenční detektory využívají určité vlnové délky světla k excitaci sloučenin v detektoru, které se pak měří, když vyzařují fotony světla klesající zpět do méně energetického stavu. HPLC a UPLC mohou být také vybaveny MS detektory. Ty jsou obvykle druhým detektorem v řadě za PDA nebo UV-Vis detektory.

Měření kanabinoidů v systému HPLC nebo UPLC lze provádět bez odpařování vzorku pomocí tepla. V důsledku toho analýza pomocí HPLC nebo UPLC nejlépe napodobuje způsob použití u jedlých nebo poživatelných vzorků. Tím, že se vzorek při přípravě nebo analýze nezahřívá, lze získat různé informace o kanabinoidech a pochopit tak vlastnosti vzorku jako poživatelné formy konopí. Pro účely požití konopí pro léčebné nebo rekreační účely je důležité pochopit, zda jsou kanabinoidy v kyselé nebo dekarboxylované formě. Kyselé THC a kyselé CBD mají ve srovnání s dekarboxylovaným THC a CBD velmi odlišné psychoaktivní a terapeutické vlastnosti. Například THC-kyselina je neintoxická, zatímco zahřáté THC je při orálním požití ve velmi malém množství velmi intoxikující. Například jedna perorální dávka THC je 15 mg. Pokud si nejste jisti, zda jsou kanabinoidy dekarboxylované, a potřebujete ověřit obsah požitého přípravku, je důležité analyzovat orálně požité vzorky pomocí HPLC. Mnoho výrobců poživatelných konopných přípravků nerozumí jasně podmínkám úplné přeměny kanabinoidních kyselin na THC a CBD, což vede k mnoha případům částečně dekarboxylovaných poživatin a tinktur. V některých případech je důležité ověřit, že k ŽÁDNÉ dekarboxylaci nedošlo, a to pro pacienty, kteří chtějí využít program léčby kanabinoidními kyselinami, který se dekarboxylovaným formám specificky vyhýbá.

Jedním z důvodů, proč je důležité omezit použití HPLC a UPLC na konkrétní vzorky, u nichž je to nutné, je velké množství nebezpečného odpadu toxického pro životní prostředí, který vzniká v důsledku provádění analýzy pomocí HPLC. Jak bylo popsáno dříve, k přesunu analytu z injektoru do detektoru se používá vysokotlaký proud rozpouštědla. Tento proud rozpouštědla je obvykle směsí acetonitrilu a isopropylalkoholu. Jeho osudem je láhev s nebezpečným odpadem, proto je třeba se ve snaze o nízký dopad na životní prostředí vyhnout zbytečným HPLC analýzám a omezit použití této metody na poživatelné vzorky, kde je to skutečně nutné. Mezi příklady poživatelných vzorků patří tinktury, odšťavněné konopí, poživatiny a kapsle.

Jedlé konopí

Dva různé konopné pupeny mají odlišné kanabinoidní profily.

Porovnání výsledků testů – HPLC vs. GC

Druhým důvodem, proč by se HPLC a UPLC neměly používat u vzorků určených k inhalaci, je to, že výsledky nejsou vyjádřeny ve formě, v jaké budou kanabinoidy konzumovány při zahřátí a inhalaci, tedy v dekarboxylovaných formách THC a CBD, a mohou vyvolat dojem vyšší účinnosti, než konopí obsahuje. Pro pacienty s určitým dávkovacím režimem je důležité, aby byli schopni přesně vypočítat spotřebované THC a CBD. Výsledky analýzy HPLC a UPLC ukáží kromě THCA, THC, CBDA a CBD také další kanabinoidy, jako jsou CBN a CBG. Mnoho laboratoří, které používají HPLC/UPLC pro analýzu kanabinoidů z květů, vyjadřuje své konečné výsledky jako THC=THCA THC ve vzorku. To může být pro spotřebitele matoucí, protože hodnota THCA není správně matematicky převedena na ekvivalentní množství dekarboxylovaného THC. THC je forma, kterou uživatel pocítí při kouření nebo vaporizaci, proto by se míra účinnosti konopí určeného k inhalaci měla z tohoto důvodu uvádět v neutrální formě nebo formě THC, nikoli THCA.

Vyjádření výsledků jako THC THCA může způsobit vyjádření výsledků „THC“ vyšších, než jaké uživatel pocítí při kouření nebo vaporizaci, a to z následujících důvodů: THCA a CBDA jsou těžší molekuly než THC a CBD. Chcete-li vyjádřit celkový dekarboxylovaný THC, který může vzorek obsahovat, musíte nejprve upravit hodnotu THCA vynásobením THCA nebo CBDA koeficientem 0,88, abyste zohlednili tento rozdíl v molekulové hmotnosti. Pochopení převodů na obrázku níže vám pomůže porovnat výsledky, které byly získány pomocí HPLC/UPLC a GC. Měli byste také zvážit, zda jsou výsledky vyjádřeny také na základě hmotnosti sušiny. Měli byste vědět, jak laboratoř, kterou používáte, počítá a uvádí výsledky, abyste věděli, zda musíte provést některý z níže uvedených převodů, aby výsledky měly smysl pro způsob, jakým budete konopí používat.

Přepočet THCA na THC:

• Vynásobte hodnotu THCA 0,88 %
• Příklad: 21 % THCA × 0,88 = 18,5 % THC

Chcete-li převést THC na THCA:

• Vynásobte hodnotu THCA číslem 1,14
• Příklad: 17% THC × 1,14 = 19,4% THCA.

Totéž platí pro CBDA a CBD

Jak vidíte, v závislosti na typu vzorku (květina, koncentrát, jedlý vzorek nebo tinktura) může jeden typ zařízení poskytnout smysluplnější výsledky v závislosti na způsobu použití konopí.s.

• Vzorky konopí určené k inhalaci, jako jsou květy a koncentráty určené ke kouření nebo vaporizaci , by měly být analyzovány pomocí GC.
• Konopí určené k orálnímu požití by mělo být analyzováno pomocí HPLC nebo UPLC, pokud není znám nebo ověřen stav dekarboxylace.
• Při vyhodnocování výsledků testů byste měli vědět, zda jsou vyjádřeny ve formě:
  • Kyselé formy nebo dekarboxylované formy.
  • Hmotnost sušiny nebo plná vlhkost.

Mnoho pacientů a zemědělců se zajímá o to, jaké výsledky jsou typické a jak se informace liší podle kmene:

Typické výsledky THC pro květy konopí

• Od mírného po velmi silné
• Průměrná hodnota: 16.5 procent

Typické výsledky CBD pro květy konopí
Často se nenachází ve významném množství
Vždy doprovázeno THC
Bohaté na CBD: >4 % CBD v hmotnosti

Alternativní metody testování účinnosti: Tenkovrstvá chromatografie (TLC)

Testy tenkovrstvou chromatografií měří profil až 6 kanabinoidů: THC, THCV, CBD, CBN, CBG, CBC a jim odpovídající kyseliny. Testy stojí přibližně 10 USD za kus a jejich přesné provedení vyžaduje určitou praxi. Vzorek se připraví a smíchá s rozpouštědlem. Selektivní barvivo detekuje hladiny kanabinoidů a zobrazí je na blotterovém papíře. Výsledky se pak interpretují a porovnávají s grafem. Každý kanabinoid reaguje s barvivem jinak, což vede k odlišným barvám. Další informace o tenkovrstvé chromatografii naleznete na adrese www.alpha-cat.org.

Segment poskytovatelů služeb prezentuje výsledky z TLC (tenkovrstvé chromatografie) na tzv. testovacích proužcích, které se často označují jako „testovací proužky“ V některých případech jsou tyto testovací proužky propagovány jako schopné poskytnout přesné výsledky potence konopí. Obecně lze říci, že bez specializovaného vybavení jsou testovací proužky použitelné pouze k určení, zda jsou určité kanabinoidy přítomny, nikoli však k určení jejich množství (tj. síly).

Jak mohou pacienti využít výsledky potence

Pacienti se ve výdejně léčebného konopí často setkávají se závratnou řadou možností. Přesné informace o síle kanabinoidů mohou pacientům pomoci vybrat to nejlepší léčebné konopí pro jejich onemocnění nebo stav. Znalost některých informací o různých účincích a lékařském využití různých kanabinoidů může pacientovi pomoci k úspěšnému a účinnému zážitku. THC je hlavní účinnou složkou konopí, která je zodpovědná za některé omamné účinky konopí. THC se často používá k léčbě bolesti, nevolnosti, nespavosti a ztráty chuti k jídlu – kromě mnoha jiných potíží. CBD je druhým nejčastěji zastoupeným kanabinoidem a je považován za neintoxikující složku konopí, ačkoli při konzumaci má u většiny z nich jasné účinky měnící náladu. CBD poskytuje úlevu od svalových křečí, záchvatů a úzkosti, je známo, že má antibakteriální a protinádorové účinky a prodlužuje účinky THC. CBN je rozkladný produkt THC. Přítomnost CBN může naznačovat, že výrobek je starý nebo nebyl správně skladován. CBN vzniká, když je THC dlouhodobě vystaven UV záření a kyslíku. CBN má některé terapeutické vlastnosti a bylo prokázáno, že snižuje srdeční frekvenci a tlumí křeče. Pacienti uvádějí, že kanabinoidní kyseliny jako THCA a CBDA přinášejí úlevu od příznaků spasticity a křečí.

Výdejny léčebného konopí, jako je například Abatin Wellness Center v Sacramentu v Kalifornii, jsou dobře zásobeny.

Testujte kanabinoidní profil vegetativních rostlin, abyste zjistili, zda jsou vhodné pro šlechtitelský program.

Testování účinnosti kanabinoidů jako nástroj pro pěstitele a šlechtitele

Vzhledem k tomu, že počet uživatelů léčebného konopí stále roste, existuje stále větší poptávka po možnostech se specifickým poměrem THC:CBD. Stejně tak roste poptávka po konopí s nejvyššími stupni účinnosti, protože účinnost se snadno promítá do množství účinných látek a hodnoty konopí na současném trhu. Poptávka po konopí se specifickým poměrem THC:CBD je často vyvolána populací s určitým onemocněním nebo chorobou. Jeden takový příklad, který v současné době získává na věhlasu, se týká specifických potřeb dětí s typem epilepsie známým jako Dravetův syndrom. U těchto dětí, které trpí také vývojovými, kognitivními a emocionálními problémy, nejsou neobvyklé zprávy o 400 až 800 záchvatech denně. Zoufalství vede rodiče těchto dětí k experimentování s výtažky z konopí jako léčbou stavu jejich dítěte. Typ konopí, který tyto děti potřebují ke zmírnění záchvatů, je téměř výhradně CBD s velmi malým množstvím THC. Preferovaný poměr THC:CBD u většiny dětí s Dravetovou nemocí léčených konopím je 1:20 nebo vyšší. Tento typ konopí byl poprvé izolován a identifikován teprve asi 4 roky před vydáním této knihy. V té době byla známa pouze jedna rostlina a její zdroj. Zázrak, který tento konkrétní druh konopí představoval pro rodiny těchto dětí, posunul konopí bohaté na CBD do hlavního proudu, jak ukazuje dokumentární film CNN, který natočil Dr. Sanjay Gupta. V důsledku toho prudce vzrostla poptávka po konopí s tímto specifickým poměrem THC:CBD.

Na této stránce s testy tenkovrstvé chromatografie jsou zastoupeny kanabinoidní profily 14 různých odrůd konopí.

Stejně jako byl poprvé izolován tento první kmen s poměrem 1:20 (známý jako ACDC), byla v nezávislé konopné laboratoři v Kalifornii na základě předběžného výzkumu Pacifica a spol. v Itálii vyvinuta technika, která by umožnila rychlý vývoj a izolaci tohoto vzácného a nyní důležitého druhu konopí. Ve společnosti Pure Analytics byl vyvinut program pro analýzu a interpretaci údajů o kanabinoidech ve vegetativním stadiu, který usnadňuje rychlou izolaci s vysokým obsahem CBD, charakterizaci poměru a optimalizaci síly CBD a THC, jakož i předpověď absolutních čísel síly, pokud jsou vzorky rostlin odebrány ve správném stadiu vývoje. Jen ve vegetační sezóně 2014 byly izolovány stovky fenotypů s poměrem 1:20 THC:CBD, z nichž měly být vypěstovány rostliny a zpřístupněny na trhu s léčebným konopím. Tato technika může při správném provedení a správné interpretaci dat umožnit pěstitelům získat křišťálovou kouli, po které vždy toužili, a zjistit, co budou květy produkovat ještě před jejich vytvořením.

Po přípravě a otestování se kolečka vzorku změří pomocí plastového kalibračního měřicího nástroje, aby se rozeznala hladina kanabinoidů.

Díky testu kanabinoidů ve vegetativním stádiu provedenému pomocí patentovaného protokolu vyvinutého laboratoří Pure Analytics Lab v Kalifornii může farmář určit svůj poměr THC:CBD na počátku růstového cyklu, identifikovat rostliny s nejvyšším potenciálem akumulace kanabinoidů a získat předpověď konečné síly květů. Farmář může určit poměr kanabinoidů u samčích i samičích rostlin a tyto poměry zůstanou zachovány po celou dobu zrání a kvetení rostliny. To znamená, že poměr kanabinoidů 1:20 určený u dvoutýdenní vegetativní rostliny bude mít za následek květy se stejným poměrem THC:CBD. Tato technika rovněž umožňuje identifikovat sazenice s největším potenciálem akumulace kanabinoidů, což pěstiteli umožňuje identifikovat své nejsilnější kmeny s požadovaným poměrem THC:CBD ještě ve vegetativním stádiu. Jedná se o silný pokrok umožňující klonování samic i samců s požadovanými vlastnostmi ve vegetativním stádiu, což umožní strategické masové šlechtění geneticky identických klonů, a tím vytvoření konzistentnější výsledné populace semen. Další informace o používání testování ve vegetativním stádiu naleznete na adrese www.pureanalytics.net/blog.

Silně výnosná odrůda ‚Cannatonic × Sour Tsunami‚ s vysokým obsahem CBD byla vyvinuta pomocí testů poskytnutých společností Pure Analytics.

Měření obsahu kanabinoidů v samčích rostlinách před jejich rozkvětem. Vyberte samčí rostliny s žádoucím kanabinoidním profilem pro šlechtitelské programy.

Testování bezpečnosti konopí – pesticidy, mikrobiologické a jiné kontaminanty

Ačkoli je testování kanabinoidů nekonečně fascinující, pro zdraví a blaho pacientů užívajících konopí, jehož produkci nemají pod kontrolou, mají význam i další typy testování konopí. Mnoho výdejen léčebného konopí testuje různé typy kontaminantů, které mohou být pro pacienty škodlivé. Patří mezi ně analýza pesticidů a mikrobiologická analýza, jakož i testy na zbytky chemických látek, jako jsou rozpouštědla, nečistoty z rozpouštědel, těžké kovy a zbytky živin. Existuje mnoho různých způsobů, jak daný typ analýzy provést. Například analýzu pesticidů lze provádět pomocí různých zařízení.

U pesticidů je důležité, aby byla pokaždé provedena chromatografická analýza a aby byla dostatečně citlivá, aby měla smysl. Existují „zkratky“, které jsou lákavé k použití, protože jsou levnější a rychlejší, ale nejsou adekvátní náhradou za úplnou chromatografickou analýzu. Problémem zkratek, jako jsou imunoanalytické screeny nebo obecné screeny využívající k detekci hmotnostní spektrometr, je to, že obecně nemohou dosáhnout detekčního limitu, který by byl skutečně významný vzhledem k potenciální kontaminaci pesticidy. Například pokud kontaminant může představovat zdravotní riziko při koncentraci 50 částic na miliardu nebo ug/kg, pak screening pesticidů, který dokáže detekovat kontaminaci pouze při vyšších koncentracích, jako je 100 částic na milion nebo mg/kg, není smysluplný ani zvlášť užitečný.

Při porovnávání různých přístupů k analýze pesticidů je třeba vzít v úvahu několik klíčových oblastí:

5. Použité vybavení.
6. Citlivost metody, označovaná také jako „detekční limit“.
7. Sloučeniny, které jsou analyzovány a vykazovány.
8. Zda se při identifikaci pozitivního nálezu používají referenční standardy certifikované třetí stranou.

Je důležité si uvědomit, že ne každý typ uvedeného vybavení dokáže odhalit všechny pesticidy, které mohly být použity. Některé detektory jsou velmi specifické a některé jsou obecnější. Z toho vyplývá, že čím je detektor obecnější, tím je jeho citlivost na potenciální kontaminaci pesticidy nižší. Jak již bylo uvedeno dříve, pokud není speciálně nakonfigurován, není hmotnostní spektrometr nejlepší volbou pro detekci kontaminace pesticidy vzhledem k jeho vyššímu prahu detekce, což znamená, že pravděpodobně nevidí kontaminaci na úrovni stop. Použití detekce hmotnostním spektrometrem může také vést ke špatným návykům v laboratoři. Analýza pesticidů není triviální a její provedení není ani levné. Má-li být provedena správně, měla by být každá třída pesticidů analyzována a vyhodnocena zvlášť s použitím detektoru, který je na danou třídu sloučenin nejcitlivější. Například chlorované pesticidy by měly být vždy potvrzeny pomocí GC-ECD (plynová chromatografie s detekcí elektronového záchytu) a fenoxykyselé herbicidy pomocí HPLC-FD (vysokoúčinná kapalinová chromatografie s fluorescenční detekcí). Vždy by měly být také potvrzeny na základě certifikovaného referenčního materiálu daného pesticidu. To znamená, že pokud je uváděna přítomnost myklobutanilu, měl by být spolu se vzorkem analyzován myklobutanil zakoupený jako certifikovaný referenční standard třetí stranou od chemické společnosti. Pokud se tak nestalo, výsledek nebyl validován. To nás vede k vysvětlení, jak může používání hmotnostních spektrometrů vést ke špatným návykům v laboratoři.

TYPY PŘÍSTROJŮ VHODNÝCH PRO ANALÝZU PESTICIDŮ

Hmotnostní spektrometry jsou úžasná zařízení s obrovskou schopností identifikovat neznámé sloučeniny, které se mohou nacházet ve směsi. Hmotnostní spektrometry jsou prostřednictvím svého softwaru vybaveny přístupem do výkonné databáze NIST (National Institute of Standards and Technology), kterou v průběhu let vytvořily tisíce vědců, kteří do NIST předali svá data. Umožňuje vyhledávat v databázi ve vztahu k datovému bodu z hmotnostní spektroskopické analýzy. Software prohledá databázi a najde nejbližší shodu s hodnocením pravděpodobnosti, že se jedná o pravdivý výsledek. To je přijatelné pro předběžnou identifikaci kontaminantu, ale není to základ pro hlášení, že je sloučenina přítomna. Aby se jednalo o legitimní výsledek identifikující konkrétní sloučeninu, musí být ověřen na základě certifikovaného chemického standardu pro stejnou sloučeninu.

Zde je několik klíčových otázek, které je třeba položit poskytovateli služeb, když se dozvíte o jeho analýze pesticidů:

1. Jaký typ zařízení používáte k provádění analýzy pesticidů?

• V odpovědi chcete slyšet „chromatograf“. Všechny vzorky potřebují minimálně chromatografické vyšetření z jednoho typu zařízení uvedeného na tomto seznamu) . Všimněte si, že ne všechna zařízení mají stejnou citlivost nebo „vidí“ stejné sloučeniny, a..

2. Které sloučeniny analyzujete?

• Měli by vám být schopni poskytnout seznam sloučenin, které mohou detekovat. Pokud sloučenina není na jejich seznamu, při analýze ji „neuvidí“.
• Pokud odpověď zní: „Testujeme všechno,“ může to znamenat, že nepoužívají certifikované referenční standardy. Tuto odpověď často poskytují ti, kteří provádějí screening pomocí hmotnostní spektrometrie. Nejenže se pravděpodobně nepoužívají referenční standardy, ale je nepravděpodobné, že by detekční limit byl smysluplný.

3. Jaký je váš detekční limit?

• Chcete slyšet „rozmezí částic na miliardu (ppb) až nízké rozmezí částic na milion (ppm)“ Detekce se může lišit v závislosti na tom, o jakou chemickou látku se jedná.
• Může se také objevit jako rozsah μg/kg až nízký rozsah mg/kg.

Ke screeningu léčebného konopí se používají také mikrobiologické analýzy. Většina poskytovatelů služeb provádí screening na kontaminaci plísněmi a houbami, zatímco jiní provádějí také screening na bakteriální kontaminaci, která nabývá většího významu vzhledem k produktům určeným k orálnímu požití. Metody používané ke screeningu mikrobiologické kontaminace zahrnují mikroskopii, analýzu PCR (polymerázová řetězová reakce), nátěry a kultivaci pomocí destiček, které mohou indikovat třídy organismů, screening mykotoxinů pomocí TLC a další. Všechny kromě mikroskopie mohou poskytovat falešně pozitivní výsledky v důsledku nesprávné manipulace nebo křížové kontaminace vzorků.

Analýzy těžkých kovů se obvykle provádějí pomocí ICP-MS (hmotnostní spektrometr s indukčně vázaným plazmatem), a pokud jsou provedeny správně podle definovaných metod, nabízejí poměrně spolehlivou analýzu. Rezidua živin lze analyzovat různými metodami v závislosti na tom, jaký typ kontaminace se předpokládá. ICP-MS a iontová chromatografie by byly dva nejpravděpodobnější přístupy.

Zaměření na bezpečnost – kontaminace Aspergilus, proč na ní záleží

Aspergillus je rod, který se skládá z více než několika stovek druhů plísní. Vyskytuje se ve většině klimatických oblastí, kde roste konopí. Některé druhy rodu Aspergillus mohou u zvířat – včetně lidí – způsobit vážná onemocnění. Aspergillus fumigatus a A. flavus jsou nejproblematičtější, protože produkují aflatoxin, toxin a karcinogen. Oba druhy mohou kontaminovat konopí – včetně poživatin. Druhy A. fumigatus a A. clavatus běžně způsobují alergická onemocnění. Další druhy rodu Aspergillus často infikují obiloviny.

Pěstování organického léčebného konopí je jedním z nejlepších způsobů, jak se vyhnout kontaminovanému léku.

Plicní aspergilózu obvykle způsobuje A. fumigatus, což vede k infekci paranazálních dutin. Mezi příznaky patří kašel, bolest na hrudi, horečka a dušnost; tyto společné příznaky znesnadňují diagnostiku. Náchylní jsou pacienti s astmatem, cystickou fibrózou, zánětem vedlejších nosních dutin, AIDS, slabým imunitním systémem a oslabenými plícemi, stejně jako pacienti léčení chemoterapií.