Medição dos canabinóides – Capítulo 2

Por Samantha Miller, Presidente e Cientista-Chefe do Pure Analytics Cannabis Laboratory.

Com o surgimento dos dispensários de canábis medicinal, vários outros tipos de empresas e fornecedores de serviços evoluíram para ajudar a apoiar as suas necessidades, incluindo laboratórios que testam produtos para a indústria da canábis medicinal. Antes da existência da legalização da canábis medicinal, os testes de canábis estavam limitados a análises realizadas como parte de uma investigação criminal ou no âmbito de apenas alguns programas de investigação, como o da Universidade do Mississippi, supervisionado pelo Dr. Mahmoud ElSolhy, ou, em Israel, o do Dr. Raphael Mechoulam, que realizam investigação sancionada pelo governo.

Hoje em dia, o desenvolvimento e os avanços dos laboratórios independentes de testes de canábis nos estados com legalização da canábis medicinal e recreativa representam um progresso emocionante na procura de canábis de qualidade medicinal cultivada e processada de acordo com normas específicas. Também é emocionante a fundação de uma ferramenta poderosa para o agricultor independente de canábis para conduzir programas estratégicos de reprodução focados no isolamento de características de interesse e no aumento da potência de uma forma preditiva, utilizando testes na fase vegetativa para ajudar na seleção de plantas para reprodução ou cultivo. Vê “Cannabinoid Potency Testing as a Tool for the Farmer and Breeder”.

Dr. Mechoulam a dar uma palestra na Universidade Hebraica de Jerusalém

Vários tipos de testes são realizados por laboratórios especializados em análise de canábis para apoiar o modelo de dispensário médico, incluindo testes de potência de canabinóides; rastreio microbiológico de bolores, fungos e bactérias; e testes de pesticidas que procuram resíduos de químicos nocivos que possam ter sido aplicados durante o ciclo de crescimento. Como os serviços de testes e a canábis legalizada proliferaram e o mercado de produtos evoluiu e mudou rapidamente, o mesmo aconteceu com as ofertas dos laboratórios de canábis. Muitos laboratórios oferecem agora testes para sabores e compostos de fragrâncias (conhecidos como terpenos) contidos na canábis. A gravitação em direção aos concentrados extraídos quimicamente, conhecidos como cera, shatter, dabs e outros, também resultou na procura de serviços específicos, como testes de solventes residuais e testes de impurezas tóxicas encontradas no gás butano, propano e CO2 de baixa qualidade, frequentemente utilizado para fazer cera. Em regiões onde a regulamentação está em foco, também encontrarás requisitos impostos pelo estado, como no Nevada, que exige testes de metais pesados e testes de fertilizantes e nutrientes residuais.

O dispensário de canábis medicinal, Florin Wellness Center (FWC), está a fazer um negócio rápido nesta fotografia tirada por Paul Clemons.

O primeiro laboratório de canábis dos EUA abriu no Colorado. Muitos outros se seguiram rapidamente, a maioria na Califórnia, onde o florescente mercado de dispensários viu a proliferação de centenas de dispensários numa única cidade, quase de um dia para o outro. O tipo mais comum de teste realizado pelos laboratórios de canábis é o teste de potência canabinóide. Os testes de potência fornecem aos pacientes de canábis medicinal informações importantes sobre os compostos activos da sua canábis. Isto pode ajudá-los a selecionar a canábis certa para eles com base na sua doença específica, dizendo-lhes quais os compostos activos presentes e as suas quantidades relativas. Os canabinóides normalmente testados incluem THC, THCA, CBD, CBDA, CBN, CBC e CBG, e em breve incluirão THCV e CBDV, graças aos esforços das empresas de fabrico de produtos químicos que apoiam as necessidades específicas da indústria de testes de canábis.

Os laboratórios americanos de canábis estão limitados no que diz respeito aos canabinóides que podem legitimamente incluir nas suas análises, dependendo dos canabinóides que estão disponíveis para compra como padrões de referência certificados de empresas de padrões químicos nos EUA. Aquando da publicação deste livro, os padrões de referência de canabinóides disponíveis nos EUA para utilização pelos analistas incluem: THC, THCA, CBD, CBDA, CBG, CBN, CBDV e CBC. Estes padrões de referência são canabinóides purificados em solução e são utilizados para calibrar o equipamento utilizado para medir a potência. Estas soluções de referência certificadas são o que permite ao químico identificar e quantificar os canabinóides presentes num extrato. Quando o equipamento é devidamente calibrado utilizando padrões de referência certificados, dois laboratórios diferentes devem ser capazes de medir a mesma canábis extraída e fornecer um resultado semelhante. Alguns laboratórios de canábis optam por comunicar os canabinóides com base em dados teóricos em vez de verificar a identidade e a quantidade com base na utilização de um padrão de referência químico certificado. Esta prática pode ser aceitável num contexto de investigação, mas não é aceitável num contexto orientado para o doente, onde os prestadores de serviços devem funcionar segundo as mesmas normas “como se” estivessem a ser regulados pelo governo federal e as suas análises fossem “certificadas” No entanto, num mercado de prestadores de serviços muito concorrido e altamente competitivo, muitos vão “tentar” afirmar que podem prestar serviços ou analisar determinados compostos, como canabinóides exóticos e raros, que outros não podem, numa tentativa de desenvolver uma vantagem competitiva no mercado de testes de canábis. Se mais ninguém está a testar um determinado composto, é provável que haja uma razão para isso, e a legitimidade da análise pode ser posta em causa. Isto leva-nos à importância de selecionar um fornecedor de serviços que possa fornecer resultados fiáveis e precisos.

Vários concentrados de canábis (da esquerda para a direita): cera, shatter, bubble-hash e kief (haxixe) prensado.

Seleção de um laboratório de canábis

Quando os dispensários, os pacientes e os agricultores decidem escolher o fornecedor de serviços mais adequado para eles, pode rapidamente parecer que estão a percorrer uma ladainha confusa de opiniões, discursos de marketing e opções. Ter os factos à mão sobre os processos e equipamentos de teste relativos às tuas próprias necessidades pode ajudar-te a encontrar o melhor fornecedor de serviços para as tuas necessidades.

Os testes de potência de canabinóides têm sido de longe os mais controversos durante a infância da indústria independente de laboratórios de testes de canábis nos EUA. Levou a muitos testes cegos de fornecedores de serviços dentro de uma região por vários grupos que procuram legitimar o processo de testes ou expor falhas nas práticas dos fornecedores de serviços de testes de canábis. Um desses “testes em anel”, publicado no jornal O’Shaughnessy’s de canábis medicinal em 2011, foi realizado pela California NORML e incluiu os laboratórios de canábis que ofereciam serviços no estado da Califórnia na altura. Os resultados de 10 laboratórios foram bastante reveladores e reforçaram o facto de ser necessária a utilização de materiais de referência certificados para que os resultados de laboratório para laboratório estejam de acordo. Os laboratórios que “fabricaram os seus próprios” padrões de referência química, em vez de adquirirem padrões certificados, obtiveram resultados que se desviaram significativamente do resto do grupo, ao passo que se observou uma boa concordância entre alguns laboratórios. O teste trouxe à luz vários princípios básicos que podem servir de guia na avaliação de um laboratório de canábis.
Compreender os processos e o equipamento de teste pode ajudar-te a escolher os fornecedores de serviços e as opções de teste mais adequadas às tuas necessidades. Diferentes fornecedores de serviços especializam-se em diferentes tipos de amostras e oferecem diferentes opções analíticas. No ambiente não regulamentado dos testes de canábis no momento em que este artigo foi escrito, não existe uma forma específica de efetuar um determinado tipo de análise. Isto leva à utilização de uma variedade de métodos diferentes, o que torna confuso para o paciente e para o agricultor interpretar e compreender como comparar os resultados entre os fornecedores de serviços. Saber algumas coisas importantes pode ajudar a guiar-te na direção certa.

Esta colheita de botões de ‘Bubba Kush’ mediu entre 13 e 19% de THC. As amostras foram recolhidas em diferentes partes das plantas.

COMPARAÇÃO ENTRE GC E HPLC OU UPLC

O processo de teste de potência

Os passos básicos do processo de teste de potência que afectam a exatidão e a precisão dos resultados são

1. amostragem
2. calibração do equipamento
3. qualidade dos padrões químicos de referência utilizados
4. experiência e conhecimentos da pessoa que efectua o trabalho

A amostragem pode ser efectuada em várias fases do percurso da cannabis desde o agricultor até ao paciente. O produto pode começar por ser recolhido na exploração agrícola e fornecido a um dispensário, que depois recolhe uma amostra para enviar ao laboratório, onde a canábis é finalmente recolhida pelo próprio laboratório. Cada etapa do processo – bem como o manuseamento da amostra – pode influenciar os resultados finais da potência e a presença de canabinóides como o CBN (um produto de degradação). Em cada ponto em que é manuseada e amostrada, a amostra de canábis deve ser representativa de toda a quantidade de material de que é selecionada. Para o agricultor com vários quilos da mesma variedade de canábis, colher uma amostra representativa significa fazer uma seleção de botões de vários tamanhos de várias plantas e várias partes da planta. Um tamanho de amostra recomendado para enviar para o laboratório é de 0,25 a 1 grama (0,008-0,035 oz) por libra de material.

No laboratório, a amostra deve ser cortada ou moída para homogeneizá-la ou torná-la uniforme. Uma porção desta amostra homogeneizada é pesada em balanças muito sensíveis e depois extraída com solventes como o metanol ou o álcool isopropílico para análise. As balanças utilizadas para pesar as amostras devem ser calibradas regularmente e deve ser mantido um registo datado dessas calibrações. Em alguns laboratórios, as amostras são secas até atingirem um teor de humidade zero antes de serem pesadas para análise. Dependendo da quantidade de humidade existente no material vegetal, isto pode afetar grandemente os resultados, entre 3 a 10 por cento do peso. A extração da amostra envolve a colocação de uma quantidade medida de solvente num frasco com a amostra de canábis pesada. Diferentes laboratórios utilizam diferentes solventes para a sua extração. Nem todos os solventes conseguem extrair completamente todos os canabinóides. O metanol, o etanol e o isopropanol são as melhores opções para uma extração completa (também conhecida como exaustiva), enquanto a acetona e o hexano utilizados por alguns prestadores de serviços não extraem o THC e o CBD de forma tão completa. Esta extração incompleta causaria uma diminuição geral dos resultados de potência. Após a adição do solvente, o processo de extração pode variar. Alguns aquecem a amostra para extrair; outros sonicam-na utilizando ondas ultra-sónicas ou colocam-na num banho de agitação ou numa mesa. A utilização de um banho de água ultrassónico é geralmente o melhor método para a extração completa de canabinóides. (Encontra um estudo sobre estas questões de extração com solvente em https://www.restek.com/row).

Dependendo do tipo de amostra a ser analisada, uma forma de a analisar pode ser mais apropriada do que outra. A maioria dos testes de potência e de pesticidas em amostras de canábis envolve a análise da amostra utilizando algum tipo de equipamento de cromatografia. Dois tipos comuns são a cromatografia gasosa (GC) e a cromatografia líquida de alto desempenho ou de ultra alto desempenho (HPLC ou UPLC). Estas peças de instrumentação podem estar equipadas com muitos tipos diferentes de detectores. Alguns prestadores de serviços afirmam ser superiores com base no equipamento que escolheram. Ambos os tipos de instrumentação produzem resultados precisos e viáveis quando calibrados corretamente e utilizados por um operador experiente que possa interpretar e validar os dados produzidos.

Cromatografia gasosa (GC)

Um cromatógrafo de gás é um tipo de instrumentação analítica em que uma corrente de baixa pressão de gás comprimido – frequentemente hidrogénio ou hélio – empurra uma amostra do injetor para o detetor do instrumento através de um tubo de pequeno diâmetro conhecido como coluna. A coluna de um cromatógrafo de gás é um tubo de sílica fundida com 15 a 30 metros de comprimento, revestido com várias substâncias no interior. Estes revestimentos e o comprimento da tubagem fazem com que os compostos se separem uns dos outros no espaço e no tempo, à medida que percorrem a coluna. Desta forma, as amostras chegam ao detetor separadamente e podem ser medidas individualmente. Se uma análise não for efectuada corretamente ou se for efectuada demasiado depressa, dois compostos podem chegar ao detetor ao mesmo tempo e ser medidos como um só composto, o que resulta num resultado errado.

Os cromatógrafos de fase gasosa podem ser equipados com vários tipos de detectores. Os tipos mais comuns de detectores para os testes de potência da canábis incluem o FID (detetor de ionização de chama), o MS (espectrómetros de massa) e o TCD (detetor de condutividade térmica). Os detectores FID e MS são as melhores escolhas para uma análise fiável de canabinóides por GC. A análise de pesticidas pode incluir detectores como o ECD (detetor de captura de electrões), o NPD (detetor de azoto-fósforo) ou o PFPD (detetor fotométrico de chama pulsada).

No caso de todos os tipos de detectores GC, o extrato da amostra que é injetado no instrumento é frequentemente aquecido a temperaturas entre 302ºF e 392ºF (150°C-200°C). Para vaporizar a amostra de modo a que possa ser movida do injetor para a coluna pelo fluxo de gás, a amostra também é queimada quando chega a um detetor FID. Esta vaporização da amostra descarboxila ou ativa quaisquer canabinóides ácidos como se tivessem sido queimados ou vaporizados. Num detetor de espetrómetro de massa, a amostra é ionizada e fragmentada de forma a identificar os compostos presentes. A vaporização da amostra faz da cromatografia gasosa a melhor opção para a análise de amostras de canábis destinadas a serem inaladas por combustão ou vaporização. Do ponto de vista analítico, esta medição direta dos canabinóides no seu estado descarboxilado imita melhor a experiência do paciente após a inalação.

Percurso da amostra num cromatógrafo de gás

Amostrador automático de cromatografia gasosa

Cromatógrafo líquido de alta eficiência. (Os cromatógrafos líquidos de ultra-alto desempenho têm o mesmo aspeto)

Cromatografia líquida de alto e ultra-alto desempenho (HPLC e UPLC)

A cromatografia líquida de alto e ultra-alto desempenho é normalmente designada por HPLC e UPLC. A diferença entre HPLC e UPLC é a pressão máxima que a instrumentação pode suportar. Os instrumentos UPLC podem analisar mais rapidamente e ainda manter a exatidão na maioria dos casos, em comparação com a HPLC. Em HPLC e UPLC, um fluxo de solvente de alta pressão ajuda a mover os compostos do injetor para o detetor. Tal como no GC, existem vários tipos de detectores que são normalmente utilizados para a análise de canabinóides. Os detectores UV-Vis (espetroscopia ultravioleta-visível) utilizam comprimentos de onda da luz que passa através da amostra para medir o que lá se encontra. Os detectores de arranjo de fotodíodos (PDA) e de fluorescência utilizam determinados comprimentos de onda de luz para excitar os compostos no detetor, que são depois medidos à medida que emitem fotões de luz que caem para um estado menos energético. Os HPLC e os UPLC podem também ser equipados com detectores MS. Estes são geralmente um segundo detetor em linha após os detectores PDA ou UV-Vis.

A medição de canabinóides num sistema HPLC ou UPLC pode ser efectuada sem vaporizar a amostra com calor. Consequentemente, a análise por HPLC ou UPLC imita melhor o modo de utilização de amostras comestíveis ou ingeríveis. Se não aqueceres a amostra durante a sua preparação ou análise, podes obter informações diferentes sobre os canabinóides para compreenderes as propriedades da amostra como uma forma ingerível de canábis. É importante compreender se os canabinóides estão ou não na sua forma ácida ou descarboxilada para efeitos de ingestão de canábis para usos terapêuticos ou recreativos. O THC-ácido e o CBD-ácido têm propriedades psicoactivas e terapêuticas muito diferentes do THC e do CBD descarboxilados. Por exemplo, o THC-ácido não é intoxicante, enquanto o THC aquecido é muito intoxicante quando ingerido oralmente em quantidades muito pequenas. Por exemplo, uma dose oral de THC é de 15 mg. É importante analisar amostras ingeríveis por via oral por HPLC se não tiveres a certeza se os canabinóides estão ou não descarboxilados e precisares de verificar o conteúdo de uma preparação ingerível. Muitos produtores de preparações de canábis ingeríveis não compreendem claramente as condições para a conversão completa dos ácidos canabinóides em THC e CBD, o que resulta em muitos casos de comestíveis e tinturas parcialmente descarboxilados. Em alguns casos, é importante verificar se NÃO ocorreu descarboxilação para os doentes que pretendem utilizar um programa de terapia com ácidos canabinóides que evite especificamente as formas descarboxiladas.

Uma das razões pelas quais é importante restringir o uso de HPLC e UPLC a amostras específicas onde é necessário deve-se à grande quantidade de resíduos perigosos tóxicos para o ambiente que são produzidos como resultado da realização de análises por HPLC. Tal como descrito anteriormente, é utilizado um fluxo de solvente a alta pressão para mover a substância a analisar do injetor para o detetor. Este fluxo de solvente é geralmente uma mistura de acetonitrilo e álcool isopropílico. O seu destino é a garrafa de resíduos perigosos, pelo que se devem evitar análises HPLC desnecessárias, num esforço para reduzir o impacto ambiental, e restringir a utilização deste método a amostras ingeríveis, quando for realmente necessário. Alguns exemplos de amostras ingeríveis incluem tinturas, sumos de canábis, comestíveis e cápsulas.

Canábis comestível

Dois botões de canábis diferentes têm perfis canabinóides distintos.

Comparação de resultados de testes – HPLC vs. GC

Uma segunda razão pela qual a HPLC e a UPLC não devem ser utilizadas em amostras destinadas a inalação é que os resultados não são expressos na forma em que os canabinóides serão consumidos quando aquecidos e inalados, as formas descarboxiladas de THC e CBD, e podem dar a perceção de uma potência superior à que a canábis contém. Para os pacientes que seguem um regime de dosagem específico, é importante poder calcular com precisão o THC e o CBD consumidos. Os resultados da análise por HPLC e UPLC mostram THCA, THC, CBDA e CBD, para além de outros canabinóides, como CBN e CBG. Muitos laboratórios que utilizam HPLC/UPLC para a análise de canabinóides em flores expressam os seus resultados finais como THC=THCA THC numa amostra. Isto pode ser confuso para o consumidor porque o valor de THCA não é corretamente convertido matematicamente para a sua quantidade equivalente de THC descarboxilado. O THC é a forma que será experimentada pelo utilizador quando fumado ou vaporizado, pelo que a medida de potência da canábis destinada a inalação deve ser na forma neutra ou THC em vez de THCA.

A expressão dos resultados como THC THCA pode causar a expressão de resultados de “THC” superiores aos que o utilizador experimentará ao fumar ou vaporizar, devido às seguintes considerações: O THCA e o CBDA são moléculas mais pesadas do que o THC e o CBD. Para expressar o total de THC descarboxilado que uma amostra pode conter, deves primeiro ajustar o valor de THCA multiplicando o THCA ou o CBDA por um fator de 0,88 para ter em conta esta diferença de peso molecular. A compreensão das conversões na figura abaixo pode ajudar-te a comparar resultados gerados por HPLC/UPLC e GC. Deves também considerar se os resultados são expressos numa base de peso seco ou não. Deves saber como o laboratório que estás a utilizar calcula e comunica os resultados para saberes se tens de efetuar alguma das conversões indicadas abaixo para que os resultados sejam significativos para a forma como vais utilizar a canábis.

Para converteres THCA em THC:

• Multiplica o valor de THCA por 0,88%
• Exemplo: 21% de THCA × 0,88 = 18,5% de THC

Para converteres THC em THCA:

• Multiplica o valor de THCA por 1,14
• Exemplo: 17% THC × 1,14 = 19,4% THCA.

O mesmo se aplica ao CBDA e ao CBD

Como podes ver, dependendo do teu tipo de amostra (flor, concentrado, comestível ou tintura), um tipo de equipamento pode fornecer resultados mais significativos, dependendo da tua utilização de canábis.

• As amostras de canábis para inalação, tais como flores e concentrados para serem fumados ou vaporizados , devem ser analisadas por GC.
• A cannabis para ingestão oral deve ser analisada por HPLC ou UPLC se o estado de descarboxilação for desconhecido ou não for verificado.
• Ao avaliares os resultados dos testes, deves saber se são expressos em termos de:
  • Formas ácidas ou formas descarboxiladas.
  • Peso seco ou humidade total.

Muitos pacientes e agricultores perguntam-se quais são os resultados típicos e como a informação varia consoante a estirpe:

Resultados típicos de THC para flores de canábis

• Varia de leve a muito forte
• Média: 16.5 por cento

Resultados típicos de CBD em flores de canábis
Muitas vezes não se encontra em quantidades significativas
Sempre acompanhado de THC
Rico em CBD: >4% de CBD por peso

Métodos alternativos de teste de potência: Cromatografia de camada fina (TLC)

Os testes de cromatografia de camada fina medem o perfil canabinóide para até 6 canabinóides: THC, THCV, CBD, CBN, CBG, CBC e os seus ácidos correspondentes. Os testes custam cerca de 10 USD cada e requerem alguma prática para serem efectuados com precisão. A amostra é preparada e misturada com um solvente. Um corante seletivo detecta os níveis de canabinóides e mostra-os no papel mata-borrão. Os resultados são depois interpretados e comparados com um gráfico. Cada canabinóide reage de forma diferente com o corante, resultando em cores distintas. Consulta www.alpha-cat.org para obteres mais informações sobre a cromatografia em camada fina.

Um segmento de prestadores de serviços apresenta os resultados da TLC (cromatografia de camada fina) naquilo que é frequentemente designado por “tiras de teste” Em alguns casos, estas tiras de teste são promovidas como sendo capazes de fornecer resultados precisos sobre a potência da canábis. Em geral, sem equipamento especializado, as tiras de teste só são viáveis para dizer se determinados canabinóides estão ou não presentes, mas não para dizer a quantidade presente (ou seja, a potência).

Como é que os pacientes podem utilizar os resultados da potência

Os pacientes são muitas vezes confrontados com uma variedade vertiginosa de opções num dispensário de canábis medicinal. Ter informações precisas sobre a potência dos canabinóides pode ajudar os pacientes a selecionar a melhor canábis medicinal para a sua doença ou condição. Conhecer um pouco sobre os diferentes efeitos e aplicações médicas dos vários canabinóides pode ajudar o doente a ter uma experiência bem sucedida e eficaz. O THC é o principal ingrediente ativo da canábis, responsável por alguns dos efeitos intoxicantes da canábis. O THC é frequentemente utilizado para tratar a dor, a náusea, a insónia e a perda de apetite – entre muitas outras doenças. O CBD é o segundo canabinóide mais predominante e é considerado um ingrediente não intoxicante da canábis, embora quando consumido tenha efeitos claros de alteração do humor para a maioria. O CBD alivia espasmos musculares, convulsões e ansiedade, é conhecido por ter atividade antibacteriana e antitumoral e prolonga os efeitos do THC. O CBN é o produto de degradação do THC. A presença de CBN pode indicar que um produto é antigo ou não foi armazenado corretamente. O CBN forma-se quando o THC é exposto à luz UV e ao oxigénio ao longo do tempo. O CBN tem algumas propriedades terapêuticas e demonstrou diminuir o ritmo cardíaco e reduzir as convulsões. Os ácidos canabinóides, como o THCA e o CBDA, têm sido relatados por pacientes que proporcionam alívio dos sintomas de espasticidade e convulsões.

Os dispensários de canábis medicinal, como o Abatin Wellness Center em Sacramento, Califórnia, estão bem abastecidos.

Testa o perfil canabinóide das plantas vegetativas para ver se são candidatas a um programa de reprodução.

Teste de Potência Canabinóide como Ferramenta para o Agricultor e Criador

Como o número de utilizadores de canábis medicinal continua a aumentar, há uma procura crescente de opções com rácios específicos de THC:CBD. Da mesma forma, existe uma procura crescente de canábis com os níveis de potência mais elevados, uma vez que a potência se traduz imediatamente na quantidade de compostos activos e no valor da canábis no mercado atual. A procura de canábis com rácios específicos de THC:CBD é frequentemente motivada por uma população com uma doença ou enfermidade específica. Um exemplo que está a ganhar notoriedade neste momento diz respeito às necessidades específicas das crianças com um tipo de epilepsia conhecido como síndrome de Dravet. Relatos de 400 a 800 convulsões por dia não são incomuns para essas crianças, que também sofrem de problemas de desenvolvimento, cognitivos e emocionais. O desespero leva os pais destas crianças a experimentarem extractos de canábis como tratamento para a doença dos seus filhos. O tipo de canábis de que estas crianças necessitam para reduzir as suas convulsões é quase exclusivamente CBD, com muito pouco THC. O rácio preferido de THC:CBD para a maioria das crianças Dravet medicadas com canábis é de 1:20 ou superior. Este tipo de canábis foi isolado e identificado pela primeira vez apenas cerca de 4 anos antes da publicação deste livro. Nessa altura, havia apenas uma planta e uma fonte conhecidas. O milagre que este tipo específico de canábis representou para as famílias destas crianças fez com que a canábis rica em CBD se tornasse popular, tal como ilustrado num documentário da CNN realizado pelo Dr. Sanjay Gupta. Como resultado, a procura de canábis com este rácio específico de THC:CBD disparou.

Os perfis canabinóides de 14 variedades diferentes de canábis estão representados nesta página de testes de cromatografia de camada fina.

Tal como a primeira variedade 1:20 (conhecida como ACDC) foi isolada pela primeira vez, foi desenvolvida uma técnica num laboratório independente de canábis na Califórnia, com base numa investigação preliminar conduzida por Pacifico et al. em Itália, que permitiria o rápido desenvolvimento e isolamento deste tipo raro e agora importante de canábis. O programa foi desenvolvido na Pure Analytics para analisar e interpretar dados de canabinóides em fase vegetativa, a fim de facilitar o rápido isolamento de CBD elevado, a caraterização da relação e a otimização da potência de CBD e THC, bem como a previsão de números absolutos de potência quando as plantas são amostradas na fase correcta de desenvolvimento. Só na época de crescimento de 2014, foram isolados centenas de fenótipos 1:20 de THC:CBD que seriam transformados em plantas e disponibilizados no mercado de canábis medicinal. Esta técnica, quando é executada corretamente e os dados são interpretados corretamente, pode permitir aos agricultores ter a bola de cristal que sempre desejaram, para ver o que as flores irão produzir antes de se formarem.

Uma vez preparados e testados, os círculos de amostra são medidos com uma ferramenta de medição de plástico calibrada para discernir os níveis de canabinóides.

Com um teste de canabinóides na fase vegetativa efectuado utilizando o protocolo patenteado desenvolvido pelo Pure Analytics Lab na Califórnia, um agricultor pode identificar os seus rácios de THC:CBD no início do ciclo de crescimento, identificar plantas com o maior potencial de acumulação de canabinóides e obter uma previsão da potência final da flor. O agricultor pode determinar o rácio de canabinóides tanto nos machos como nas fêmeas, e estes rácios manter-se-ão durante todo o processo de maturação e floração da planta. Ou seja, um rácio de canabinóides de 1:20 identificado numa planta vegetativa com duas semanas resultará em flores com o mesmo rácio de THC:CBD. Esta técnica também permite identificar as plântulas com maior potencial de acumulação de canabinóides, permitindo ao agricultor identificar as suas estirpes mais potentes com os rácios desejados de THC:CBD ainda na fase vegetativa. Este é um avanço poderoso que permite a clonagem de fêmeas e machos com as características desejadas na fase vegetativa para permitir a criação estratégica em massa de clones geneticamente idênticos, criando assim uma população de sementes resultante mais consistente. Para mais informações sobre a utilização de testes na fase vegetativa, visita www.pureanalytics.net/blog.

A ‘Cannatonic × Sour Tsunami’, de alto rendimento e rica em CBD , foi desenvolvida utilizando testes fornecidos pela Pure Analytics.

Mede o teor de canabinóides das plantas macho antes de florescerem. Escolhe os machos com perfis canabinóides desejáveis para programas de reprodução.

Testes de segurança da canábis – Pesticidas, microbiológicos e outros contaminantes

Embora os testes de canabinóides sejam infinitamente fascinantes, outros tipos de testes de canábis também são significativos para a saúde e o bem-estar dos pacientes que utilizam canábis cuja produção não é controlada por eles. Muitos dispensários de canábis medicinal testam vários tipos de contaminantes que podem ser prejudiciais para os pacientes. Estes incluem análises de pesticidas e análises microbiológicas, bem como testes a resíduos químicos como solventes, impurezas de solventes, metais pesados e resíduos de nutrientes. Existem muitas formas diferentes de efetuar um determinado tipo de análise. Por exemplo, uma análise de pesticidas pode ser efectuada por uma variedade de equipamentos diferentes.

No caso dos pesticidas, é importante que seja sempre efectuada uma análise cromatográfica e que a análise seja suficientemente sensível para ser significativa. Há “atalhos” que são tentadores de utilizar porque são mais baratos e mais rápidos, mas não substituem adequadamente uma análise cromatográfica completa. O problema dos atalhos, como os testes de imunoensaio ou os testes gerais que utilizam um espetrómetro de massa para a deteção, é que geralmente não conseguem atingir um limite de deteção que seja verdadeiramente significativo em relação à potencial contaminação por pesticidas. Por exemplo, se um contaminante pode representar um risco para a saúde a 50 partes por bilião ou ug/kg, então um rastreio de pesticidas que só consiga detetar a contaminação a níveis mais elevados, como 100 partes por milhão ou mg/kg, não é significativo nem particularmente útil.

Ao comparar diferentes abordagens à análise de pesticidas, tens de considerar algumas áreas-chave:

5. Equipamento utilizado.
6. Sensibilidade do método, também designada por “limite de deteção”.
7. Compostos analisados e relatados.
8. Se são utilizadas normas de referência certificadas por terceiros para identificar um resultado positivo.

É importante perceber que nem todos os tipos de equipamento listados podem detetar todos os pesticidas que possam ter sido utilizados. Alguns detectores são muito específicos e outros são mais gerais. Por conseguinte, quanto mais generalizado for o detetor, mais reduzida será a sua sensibilidade a uma potencial contaminação por pesticidas. Como já foi referido, a menos que esteja especialmente configurado, um espetrómetro de massa não é a melhor escolha para a deteção de contaminação por pesticidas devido ao seu limiar de deteção mais elevado, o que significa que provavelmente não consegue detetar contaminação ao nível dos vestígios. A utilização da deteção por espetrómetro de massa pode também levar a maus hábitos no laboratório. A análise de pesticidas não é trivial, nem é barata. Para ser feita corretamente, cada classe de pesticidas deve ser analisada e avaliada separadamente, utilizando o detetor mais sensível a essa classe de compostos. Por exemplo, os pesticidas clorados devem ser sempre confirmados por GC-ECD (cromatografia gasosa com deteção por captura de electrões) e os herbicidas fenoxiácidos por HPLC-FD (cromatografia líquida de alta eficiência com deteção de fluorescência). Também devem ser sempre confirmados por comparação com material de referência certificado do pesticida. Ou seja, se for comunicada a presença de miclobutanil, o miclobutanil adquirido como padrão de referência certificado por terceiros a uma empresa química deveria ter sido analisado juntamente com a amostra. Se isso não foi feito, o resultado não foi validado. Isto leva-nos a uma explicação de como a utilização de espectrómetros de massa pode levar a maus hábitos no laboratório.

TIPOS DE INSTRUMENTOS ADEQUADOS PARA A ANÁLISE DE PESTICIDAS

Os espectrómetros de massa são equipamentos fantásticos com uma capacidade imensa de identificar compostos desconhecidos que possam estar numa mistura. Os espectrómetros de massa estão equipados com acesso, através do seu software, a uma poderosa base de dados do NIST (National Institute of Standards and Technology) desenvolvida ao longo dos anos por milhares de cientistas que submeteram os seus dados ao NIST. Permite fazer uma pesquisa na base de dados relativamente a um ponto de dados de uma análise de espetrometria de massa. O software pesquisa a base de dados e encontra a correspondência mais próxima com uma classificação de probabilidade de ser um resultado verdadeiro. Isto é aceitável para uma identificação preliminar de um contaminante, mas não é uma base para comunicar que o composto está presente. Deve ser verificado em relação ao padrão químico certificado para o mesmo composto para que seja um resultado legítimo de identificação de um composto específico.

Seguem-se algumas questões-chave a colocar a um prestador de serviços quando se informa sobre a sua análise de pesticidas:

1. Que tipo de equipamento utiliza para efetuar uma análise de pesticidas?

• A resposta deve ser “cromatógrafo”. No mínimo, todas as amostras precisam de uma análise cromatográfica de um tipo de equipamento listado aqui) . Tem em atençãoque nem todos os equipamentos têm a mesma sensibilidade ou conseguem “ver” os mesmos compostos...

2. Quais são os compostos que analisas?

• A empresa deve poder fornecer-te uma lista dos compostos que consegue detetar. Se um composto não constar da lista, não o “verás” na análise.
• Se a resposta for “Testamos tudo”, isso pode significar que não estão a utilizar padrões de referência certificados. Esta é a resposta que os que efectuam um rastreio por espetrometria de massa dão frequentemente. Não só é provável que não estejam a ser utilizados padrões de referência, como também é pouco provável que o limite de deteção seja significativo.

3. Qual é o teu limite de deteção?

• Queres ouvir “intervalo de partes por bilião (ppb) a baixo intervalo de partes por milhão (ppm)” A deteção pode variar consoante o produto químico.
• Isto também pode aparecer como um intervalo de μg/kg a um intervalo baixo de mg/kg.

As análises microbiológicas também são utilizadas para analisar a canábis medicinal. A maioria dos prestadores de serviços analisa a contaminação por bolor e fungos, enquanto outros analisam também a contaminação bacteriana, que se torna mais significativa em relação aos produtos destinados a ingestão oral. Os métodos utilizados para detetar a contaminação microbiológica incluem a microscopia, a análise PCR (reação em cadeia da polimerase), o plaqueamento e a cultura com placas que podem indicar classes de organismos, o rastreio de micotoxinas por TLC, entre outros. Todas as análises, exceto a microscopia, podem dar falsos positivos devido ao manuseamento incorreto ou à contaminação cruzada das amostras.

As análises de metais pesados são normalmente efectuadas utilizando um ICP-MS (espetrómetro de massa de plasma indutivamente acoplado) e, se forem efectuadas corretamente através de métodos definidos, oferecem uma análise bastante fiável. Os resíduos de nutrientes podem ser analisados por uma variedade de métodos, dependendo do tipo de contaminação que se prevê. O ICP-MS e a cromatografia iónica seriam as duas abordagens mais prováveis.

Foco na segurança – Contaminação por Aspergillus, porque é importante

Aspergillus é um género que consiste em mais de algumas centenas de espécies de bolores. Encontra-o na maioria dos climas onde a canábis cresce. Algumas espécies de Aspergillus podem causar doenças graves em animais – incluindo humanos. Aspergillus fumigatus e A. flavus são os mais problemáticos porque produzem aflatoxina, uma toxina e um carcinogéneo. Ambas as espécies podem contaminar a canábis – incluindo os comestíveis. As espécies A. fumigatus e A. clavatus causam normalmente doenças alérgicas. Outras espécies de Aspergillus infectam frequentemente as culturas de cereais.

Cultivar canábis medicinal biológica é uma das melhores formas de evitar medicamentos contaminados.

A aspergilose pulmonar é normalmente causada pelo A. fumigatus, o que resulta numa infeção dos seios paranasais. Os sintomas incluem tosse, dores no peito, febre e falta de ar; estes sintomas comuns dificultam o diagnóstico. Os doentes com asma, fibrose cística, sinusite, SIDA, sistemas imunitários fracos e pulmões fracos são susceptíveis, tal como os doentes que fazem quimioterapia.